ФАКТОР РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ-2 В МОЧЕ У ДЕТЕЙ С ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТОМ
Представлены результаты определения концентрации фактора роста фибробластов-2 (ФРФ-2) в моче у 65 детей с различными вариантами гломерулонефрита (ГН). Уровень ФРФ-2 в моче был почти в 2 выше при стероид-резистентным нефротическим синдромом (СРНС), чем при стероид-чувствительным нефротическим синдромом (СЧНC). При хроническим гломерулонефритом (ХГН) cмешанной формы в период обострения уровень ФРФ-2 в моче превышал в 9,2, а при ХГН нефротической форме превышал в 7,4 раза значения контрольной группы. Определение ФРФ-2 в моче при НС может быть клинически значимым маркером для определения тяжести патологического процесса, а также эффективности применяемой терапии.
Ключевые слова: фактор роста фибробластов-2, гломерулонефрит, нефротический синдром, дети.
Сiuntu A.O.
MD, assosiate professor, State University of Medicine and Pharmacy “Nicolae Testemiţanu” of Republic of Moldova
FIBROBLAST GROWTH FACTOR-2 IN THE URINE OF CHILDREN WITH GLOMERULONEPHRITIS
Abstract
Study presents the assessment of the concentration of the fibroblast growth factor beta (FGF-beta) in the urine of 65 children with various types of glomerulonephritis (GN). FGF-β levels in the urine were almost 2 times higher in steroid-resistant nephrotic syndrome (SRNS) than steroid-sensitive nephrotic syndrome (SSNS). During relapse of chronic glomerulonephritis (CGN) mixed form the FGF-β in urine increased by 9.2 times, and in CGN nephrotic form by 7.4 times compared to the values of the control group. Determination of FGF-β in urine of nephrotic syndrome may be clinically relevant marker for determining the severity of the pathological process and the effectiveness of applied therapy.
Keywords: fibroblast growth factor-2, glomerulonephritis, nephrotic syndrome, children.
Фактор роста фибробластов-2 (ФРФ-2), также известный как основной фактор роста фибробластов (оФРФ или ФРФ-β), является гепарин-связывающим пептидом, который после высвобождения из поврежденной эндотелиальной клетки стимулирует ангиогенез, неоваскуляризацию и рост почек. В почках, ФРФ-2 экспрессируется в эпителиальных клетках уже в процессе развития плода. В более поздние стадии, экспрессия этого цитокина найденa в эпителиальных клетках дистальных канальцев, клубочков и в некоторых интерстициальных клетках. ФРФ-2 регулирует пролиферацию, миграцию и дифференцировку клеток, оказывая воздействие ауто- и паракринным путем [7].
В 1991 году Wu et al., впервые описал белок связывающий фактор роста фибробластов (БС-ФРФ) [12]. БС-ФРФ может играть важную роль в высвобождении и повышении активности ФРФ-2 в почечном тубулоинтерстиции у детей с почечной недостаточностью и тем самым, участвовать в патогенезе некоторых заболеваний почек [13].
Интерпретация роли ФРФ-2 в патогенезе заболеваний почек неоднозначна. С одной стороны, способствуя пролиферации фибробластов и эпителиально-мезенхимальной трансформации канальцевых клеток, ФРФ-2 играет важную роль в развитии тубулоинтерстициального фиброза. Обнаружены высокие уровни ФРФ-2 в почках и крови ВИЧ-инфицированных детей с ВИЧ-ассоциированной нефропатией и у детей с гемолитико-уремическим синдромом (ГУС) [13]. Эти данные позволяют предположить, что ФРФ-2 высвобождается в системный кровоток и почечном интерстиций из поврежденных эндотелиальных и почечных эпителиальных клеток, что может играть определенную роль в патогенезе ГУС и ВИЧ-нефропатий [6,13].
С другой стороны, ФРФ-2 может индуцировать экспрессию репаративных белков и, тем самым, способствовать ускорению процессов тканевой репарации при его парентеральном введении [9,11], или на оборот, способствовать продолжению почечного повреждения при его ингибировании [10].
Выше изложенное указывает на важность изучения роли ФРФ-2 в развитии почечных заболеваний.
Необходимо отметить, что в литературе сведения об особенностях изменения содержания ФРФ-2 в моче у детей с различными вариантами течения гломерулонефрита практически отсутствуют. В связи с этим, изучение изменения концентрации ФРФ-2 в моче у детей с различными вариантами течения гломерулонефрита крайне актуально.
Цель исследования: изучить изменения концентрации основного фактора роста фибробластов (ФРФ-2) в моче в строго подобранных группах детей с различными вариантами течения гломерулонефрита, а также в зависимости от активности заболевания (обострение, ремиссия).
Материалы и методы. Исследования проводились в отделении нефрологии Института Матери и Ребенка, г. Кишинева, а также в лаборатории биохимии ЦНИЛ Государственного Университета Медицины и Фармации имени «Николая Тестемицану» Республики Молдова (ГУМФ) на основе биологических образцов, собранных в соответствии с принципами современных исследований, утвержденных Комитетом по этике при ГУМФ (протокол № 55 от 13.05.2015). В исследование были включены 65 детей с первичным гломерулонефритом. Дети были разделены на следующие группы: 1) острый гломерулонефрит (ОГН) с нефротическим синдромом (40 детей), в том числе 25 детей с стероид-чувствительным нефротическим синдромом (СЧНС) и 15 детей с стероид-резистентным нефротическим синдромом (СРНС); 2) хронический гломерулонефрит (ХГН) нефротической формы – 15 детей и 3) ХГН смешанной формы – 10 детей. Также пациенты были разделены на 2 подгруппы в зависимости от активности заболевания (обострение, ремиссия). Контрольная группа составила 20 практически здоровых детей, сопоставимых по полу и возрасту.
Диагноз нефротического синдрома ставился на основе клинических и лабораторных критериях и специально отобранных биохимических исследований.
Нефротический синдром (НС) был диагностирован при наличии отеков, массивной протеинурии (>40 мг/м/ 2 ч или отношение белок/креатинин в моче >2,0 мг/мг) и гипоальбуминемии (<2,5 г/дл).
Полная ремиссия устанавливалась в случае разрешения отека, повышения сывороточного альбумина до ≥3,5 г/дл и снижения протеинурии <4 мг/м 2 / час (100 мг/м 2 /24 ч) в течение трех последовательных анализах мочи. Рецидив определялся как рецидив массивной протеинурией (>40мг/м 2 /ч или отношение белок/креатинин в моче>2,0 мг/мг или альбуминурия ≥ 2+ в течение 3 последовательных дней, как правило, с рецидивом отеков.
Уровень ФРФ-2 в моче определяли с помощью коммерческого набора мини – ELISA компании Пепротех США (Peprotech–Company, USA) в соответствии с прилагаемыми инструкциями.
Для обработки результатов исследования были использованы статистические методы: оценка среднеарифметического показателя [X], среднеквадратического отклонения среднеарифметической ошибки [±m]. При статистической обработке использовали t-критерий Стьюдента и непараметрический статистический тест “Манна-Уитни U”. Значимыми считали различия при р<0,05 (Stats Direct статистическое программное обеспечение, версия 1.9.5, 2001).
Результаты. В таблице 1 представлены результаты исследования концентрации ФРФ-2 в моче у детей с различными вариантами течения гломерулонефрита (ГН).
Было установлено, что в период обострения ГН, концентрация в моче ФРФ-2 значительно увеличивается, при этом выраженность изменений зависели от формы и фазы активности заболевания (обострение, ремиссия). Так, средние показатели ФРФ-2 при ОГН нефротический синдром в период обострения в 2 раза превышали уровень таковых в контрольной группе. Уровень ФРФ-2 в моче был выше при СРНС, чем при СЧНС. Так, в период обострения при СРНС концентрация ФРФ-2 в моче увеличилась в 2,5 раза (до 43,76±4,91 нг/мМ креатинина), в то же время при СЧНС увеличилась в 1,4 раза (до 24,95±1,24 нг/мМ креатинина) по сравнению с контрольными значениями (17,64±0,76 нг/мМ креатинина).
Taблица 1 – Уровень ФРФ-2 в моче у детей с гломерулонефритом
Примечание: ОГН – острый гломерулонефрит; CЧНС – стероид чувствительный нефротический синдром; СРНС – стероид резистентный нефротический синдром; ХГН – хронический гломерулонефрит. Статистически значимая разница по сравнению с контрольной группой: * Р <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001; p1-достоверность по сравнению с показателем, зарегистрированного в острой стадии заболевания; p2-достоверность при сравнивании СЧНС с СРНС; р3– достоверность при сравнении ОГН нефротический синдром с ХГН.
В период ремиссии уровень ФРФ-2 в моче при СЧНС нормализуется, а при СРНС снижается до 24,54±1,87нг/мМ креатинина, в то же время оставаясь выше контрольных величин (p<0,01).
При ХГН нефротической формы и ХГН смешанной формы уровень ФРФ-2 был почти в 4 раза и, соответственно, в 5 раз выше, чем при ОГН с нефротическим синдромом. В период ремиссии среднее содержание ФРФ-2 в моче в этих группах больных также оказались выше, чем у больных с ОГН с нефротическим синдромом.
При ХГН cмешанной форме в период обострения уровень ФРФ-2 в моче вырос до 162,52 ± 9,73 нг/мМ креатинина, а при ХГН в нефротической форме до 130,20 ± 13,23 нг/мМ креатинина, что превышает в 9,2 и 7,4 раза, соответственно, значения контрольной группы. В период ремиссии в обеих группах уровень ФРФ-2 в моче уменьшается почти в два раза по сравнению с начальным уровнем, но остается высоким по сравнению с группой контроля.
Oбсуждение: Полученные результаты показывают, что у детей с различными клиническими вариантами гломерулонефрита уровень ФРФ-2 в моче повышается, при этом наиболее высокие значения концентрации ФРФ-2 в моче отмечены при ХГН смешанной и нефротической формы в период обострения, где концентрация ФРФ-2 превысила в 7- 9 раз показатели контрольной группы. В то время, при ОГН уровень ФРФ-2 были в 1,5-2 раза выше контрольных величин.
Известно, что при повреждениях почек усиливается экспрессия фактора роста фибробластов – ФРФ-2 [7]. Так, развитие диабетической нефропатии (ДНП) у больных сахарным диабетом 1 типа сопровождается повышением мочевой экскреции фиброгенных факторов роста (трансформирующего фактора роста-β1, фактора некроза опухолей-α, а также ФРФ-2). Процесс фиброзирования клубочков и интерстиция почек при ДНП характеризуется повышением продукции фиброгенных факторов роста, в том числе ФРФ-2 в почечной ткани [1].
Обнаруженные нами особенности изменений концентрации ФРФ-2 у детей с ГН представляются важными, поскольку в литературе имеются сообщения о том, что экспрессия этого фактора значительно усиливается при хроническом тубулоинтерстициальном склерозе, независимо от первичного заболевания. При этом, критическую роль в почечном фиброгенезе играют интерстициальные и кортикальные фибробласты с фенотипическим появлением миофибробластов, а ФРФ-2 вызывает устойчивую пролиферацию этих клеток [5,7].
При хронических заболеваниях почек наблюдается прямая взаимосвязь между экспрессией ФРФ-2 и выраженностью фиброза интерстиция [8].
С другой стороны, исследования последних лет показывают, что ФРФ-2 может способствовать уменьшению функциональных и структурных нарушений при моделировании хронической почечной болезни [11]. Этот фактор может стимулировать почечную клеточную пролиферацию и участвовать в регуляции дифференциации мезенхимальных стволовых клеток (МСК) [4]. В настоящее время считается, что МСК способны вырабатывать различные трофические факторы и, тем самым, активировать регенерацию почечной ткани [3].
Таким образом, ФРФ-2 не только индуцирует синтез репаративных белков, но также участвует в поддержание процессов образования интерстициального нефросклероза, приводящего к прогрессирующей потере функции органа. При этом, непрерывность пролиферации фибробластов, по–видимому, является одной из основных различий между фиброзом и восстановительной регенерацией в почечной ткани при почечной патологии и ФРФ-2 играет важную роль в этом процессе [8].
В то же время, механизмы которые контролируют высвобождение и активность ФРФ- β при острых и хронических заболеваниях почек, а также механизмы обеспечивающие при этом модулирование процессов повреждения, развития и регенерации почечной ткани остаются недостаточно выясненными и требуют дальнейшего изучения [1,2].
Таким образом, установленные нами особенности повышения концентрации ФРФ-2 в моче у детей с различными вариантами течения ГН, несомненно, являются одним из факторов, способствующих развитию и прогрессированию этой патологии. Определение ФРФ-2 в моче при НС может быть клинически значимым маркером для определения тяжести патологического процесса, оценки выраженности склеротических изменений в почках, а также эффективности применяемой терапии.